HPLC法同时测定伤痛克酊中3种姜黄素的含量
覃彪*a, b，邓明启a，黎敏a，林锦良a,b，唐承性a
（遵义师范学院 a.化学化工学院，b.黔北特色资源应用研究实验室，贵州遵义 563006）摘要
建立HPLC法同时测定苗药伤痛克酊中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的含有量。以伤痛克酊为酊剂，分析采用Shimadzu Inertsustain C18色谱柱（4.6 mm×250 mm×5 μm）；以9.6%冰醋酸水溶液-乙腈为流动相，梯度洗脱；检测波长为254 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃。3种姜黄素分别在各自范围内线性关系良好（r≥0.99995），平均加样回收率分别为99.07%、100.26%、101.27%，RSD分别为0.32%、0.13%、0.11%。方法简便快捷，可用于伤痛克酊的质量控制。
引言
苗药伤痛克酊是由姜黄、马蹄金、地柏枝三味药以9:4:3的比例，加入适量70%乙醇为溶剂制成，该药品是一种棕黄褐色的清亮液体，香气独特。中医用于治疗跌打损伤、热毒灼肤、消肿止痛、解毒生肌、浅Ⅱ度烧伤等症状[1]。姜黄成分含有姜黄素、挥发油、脂肪油、葡萄糖、淀粉等，其中姜黄中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量较高。姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素具有利胆、抗炎、抗氧化、抗诱变、抗肝纤维化、降血脂、抗动脉硬化等特性，能宣通血中之气，使气行而血不壅滞，且有通经止痛之功效[2]；但关于伤痛克酊质量控制研究的报道较少[3]。因此，本研究选取伤痛克酊含量最多的姜黄主要成分姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素作为含量测定指标成分，建立了高效、高选择性、高灵敏度的HPLC法以同时测定伤痛克酊中三者的含量；旨在为有效的控制其药品的质量标准提供定量分析方法和实验依据，一定程度上可客观地反应出药品伤痛克酊的质量。
目录
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 色谱条件
1.3 对照品溶液的制备
1.4 供试品溶液的制备及测定
1.双去甲氧基姜黄素；2.去甲氧基姜黄素；3.姜黄素
a.混合对照品; b.伤痛克酊供试品
图1 液相色谱图
Fig.1 HPLC Chromatograms
2 结果与讨论
2.1 线性关系考察
表1 各成分线性关系
Tab.1 Linearrelationships of various constituents
成分 | 回归方程 | r | 线性范围/μg |
双去甲氧基姜黄素 | y=2 537 310x +5 002 | 0.99997 | 0.0864～0.5184 |
去甲氧基姜黄素 | y=1 987 950x +4 885 | 0.99995 | 0.0816～0.4896 |
姜黄素 | y=1 824 350x+3 293 | 0.99998 | 0.0928～0.5568 |
2.2 精密度实验
表2 精密度实验数据
Tab.2 Precision experimentaldatas
进样量/μL | 双去甲氧基姜黄素 峰面积 RSD/% | 去甲氧基姜黄素 峰面积 RSD/% | 姜黄素 峰面积 RSD/% | |||
3
| 864336 858418 859810 857951 860370 |
0.29
| 591280 588462 586145 586538 586450 |
0.37
| 1180571 1181354 1179472 1179481 1177713 |
0.12
|
2.3 稳定性实验
表3 稳定性实验数据
Tab.3 Stability experimental datas
进样量/μL | 双去甲氧基姜黄素 峰面积 RSD/% | 去甲氧基姜黄素 峰面积 RSD/% | 姜黄素 峰面积 RSD/% | |||
10
| 4229773 4241297 4228432 4231253 4228084 |
0.13
| 4114944 4122868 4125907 4128683 4114214 |
0.16
| 6537313 6567268 6546507 6561478 6548883 |
0.18
|
2.4 重复性实验
表4 重复性实验数据
Tab.4 Repeatedexperimental datas
进样量/μL | 双去甲氧基姜黄素 峰面积 RSD/% | 去甲氧基姜黄素 峰面积 RSD/% | 姜黄素 峰面积 RSD/% | |||
10
| 4552909 4650082 4221618 4214560 4231478 |
4.81
| 4013856 4073598 4115557 4053825 4080005 |
0.92
| 6394547 6468627 6547583 6507066 6543176 |
0.97
|
2.5 加样回收率实验
2.6 样品含量测定
表8 伤痛克酊中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量测定结果
Tab.8 Determination resultsof didemethoxycurcumin, dimethoxycurcuminand curcumin inShangtongkeding
批号 | 双去甲氧基姜黄素/(mg·mL-1) | 去甲氧基姜黄素/(mg·mL-1) | 姜黄素/(mg·mL-1) |
170501 161201 150501 | 0.2530 0.6064 1.1388 | 0.3014 0.5751 1.2128 | 0.4996 0.7942 1.6082 |
2.7 讨论
3 结论
结论
本研究利用高效液相色谱可分离分析大分子、高沸点、热不稳定性化合物以及具有生物活性的物质等特点，建立了简便快捷的HPLC法同时测定3种姜黄素的含量，并选取了不同批次的伤痛克酊药品作为研究对象，从而为完善伤痛克酊的质量标准提供实验数据。通过实验获得的数据总体表明，药品存放时间、批次会对姜黄素含量产生影响，分析其原因可能是受环境温度影响或各个药材批次本身含量的影响。本实验采用HPLC法所测得伤痛克酊的精密度、稳定性和回收率等各项指标数据结果均较好。因此，本研究不仅可以为万胜药业加强药品质量控制提供依据，同时也可为其他民族药的研究提供参考。
