目录

1  实验部分

1.1 主要试剂与仪器

1.2  色谱条件

色谱柱为STC C18色谱柱（250×4.6nm，5 μm）；流动相为V（流动相甲醇）∶V（水）=6∶4；检测波长为440 nm；流速为0.8 mL/min；进样量为20 μL^[19]。

1.3  西红花苷标准曲线的绘制

取3 mg西红花苷Ⅰ标准品，加入纯水溶解、定容至50 mL棕色容量瓶中，即得初始浓度为60 μg/mL的标准品溶液，备用。

1.4  栀子果实的预处理

挑选若干饱满栀子果实45 ℃下干燥10h，粉碎，过60目筛。再将过筛后的栀子粉末干燥5 h后密封保存，备用。

1.5  西红花苷的提取方法

精确称取一定质量的栀子粉末，加入到2 mL一定浓度的提取溶剂中，在一定的料液比、提取温度、提取时间、乙醇体积分数下超声提取。3000 r/min下将提取液离心10 min，移取1mL上清液于50 mL棕色容量瓶中用纯净水定容摇匀。

1.6  西红花苷的测定及提取率计算方法

将稀释定容后的西红花苷提取液用0.45 μm水相滤膜过滤，不改变色谱条件，在保留时间为4 min时测定西红花苷吸收峰的积分面积。

2  结果与讨论

2.1  离子液体的确定

2.2  实验精密度分析

选取超声提取温度为30 ℃，超声提取时间为30 min，离子液体（[Bmim]BF₄）浓度为0.8 mol/L的60%乙醇溶液，料液比为1∶10，测定栀子中西红花苷的提取率，平行测定5次，提取率分别为1.11%、1.10%、1.11%、1.10%、1.10%，平均提取率为：1.104%，相对标准偏差为0.49，说明本实验测定西红花苷提取率的精密度较高。

2.3  单因素实验及结果分析

选取离子液体（[Bmim]BF₄）的醇溶液作为西红花苷的提取溶剂，在超声功率为500W下，分别考察了料液比、乙醇体积分数、超声提取时间、离子液体浓度以及超声提取的温度对栀子中西红花苷提取率的影响。

2.3.1  料液比对西红花苷提取率的影响

固定超声提取温度为30 ℃，超声提取时间为30 min，离子液体浓度为0.7 mol/L的60%乙醇溶液为实验条件，考察料液比分别为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40（g/mL）时栀子中西红花苷的提取率。得到不同料液比与西红花苷提取率之间的关系如图3所示。

2.3.2  乙醇体积分数对西红花苷提取率的影响

固定实验条件：离子液体浓度为0.7 mol/L，料液比1∶20（g/mL），超声提取温度为30 ℃、超声提取时间为30 min，分别考察乙醇体积分数在50%、60%、70%、80%时栀子中西红花苷的提取率。得到不同乙醇体积分数与西红花苷提取率之间的关系如图4所示。

2.3.3  超声时间对西红花苷提取率的影响

固定实验条件为料液比1∶20（g/mL），超声提取温度30 ℃，离子液体浓度0.7 mol/L，乙醇体积分数70%，考察超声时间分别为20、30、40、50 min时西红花苷的提取率，得到不同超声时间与西红花苷提取率之间的关系如图5所示。

2.3.4  离子液体浓度对西红花苷提取率的影响

固定料液比为1∶20（g/mL）、超声温度30 ℃、超声时间40 min，乙醇体积分数为70%。改变离子液体的浓度，分别考察离子液体浓度在0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2mol/L时对栀子中西红花苷提取率的影响，结果如图6所示。

2.3.5  超声温度对西红花苷提取率的影响

固定料液比为1∶20（g/mL）、超声提取时间为40 min，离子液体浓度为0.7mol/L的70%乙醇溶液为实验条件，改变超声温度，考察超声温度分别在20、30、40、50、60℃时对栀子中西红花苷提取率的影响，结果如图7所示。

2.4  响应面法优化提取工艺

2.4.1  方案设计与结果

在单因素实验结果的基础上，依据Design-Expert 8.0软件中的Box-Behnken法，以提取率为响应值，设计3因素3水平实验来进行提取工艺的优化。选取的实验因素与水平见表1，设计方案与实验结果见表2。

2.4.2  响应面法实验结果分析

利用Design-Expert 8.0软件对表5中的数据进行回归拟合，得到如下回归方程：

R=1.13+0.015×A+0.039×B+0.006625×C-0.0075×A×B+0.00225×A×C-0.002×B×C-0.088×A²–0.11×B²–0.12×C²

对拟合的响应面模型进行方差分析和显著性检验后结果如表3所示：