1.1  主要仪器与试剂

1.2  实验方法

1.2.1  GV与GV@hDOX的制备

Halo细菌于100 r/min的37℃培养箱中培养20天后将菌液转入分液漏斗，继续培养10 d，直到在顶部形成粉红色分离层。打开旋塞阀，尽可能多地去除培养基，只保留红色细胞的漂浮层。加入等体积低渗裂解缓冲液（pH 7.5），裂解2 h。将裂解物转入离心管中，4 ℃下800 r/min离心4 h。在离心管顶部可看到一层混合的GV（白色）与未溶解的Halo（粉色）。将GV和未溶解的Halo细菌转移到新管中，加入PBS。重复离心。直到没有粉红色细胞溶解物的迹象。将纯化的GV重悬在PBS中，置于4 ℃保存。

将3.37 mg EDC和2.00 mg NHS加入10 mg HA溶液中，冰浴搅拌2 h后滴加1 mL（2 mg/mL）DOX。将反应混合物在4 ℃下继续搅拌24 h，获得HA-DOX。将3.37 mg EDC和2.00 mg NHS加入HA-DOX溶液中，然后在冰浴中搅拌2 h。加入1 mL（OD₅₀₀=2.0）分散于PBS中的GV，4 ℃下搅拌24 h，所得混合物加入超滤管，1800 r离心5 min，去除游离EDC、NHS和HA，得到GV@hDOX并在4 ℃保存。

1.2.2  GV和GV@hDOX的表征

1.2.3  药物释放曲线测定

人参皂苷给药结束后，小鼠禁食2 h后注射乙醚使其麻醉，从眼眶静脉丛采集血样，采血结束后断颈法处死实验小鼠。在4 ℃下，用3000 r/min离心15 min，将全血标本放入新的EP试管。采用全自动生化分析仪，按说明书要求测定血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的含量。

2.1   GV@hDOX的表征

利用低渗裂解法裂解从Halo中提取气囊蛋白（图1a），对其尺寸、电位以及形貌进行表征。使用透射电子显微镜对其形态进行表征，GVs呈现均一的纺锤形晶体结构（图1b），经激光粒度分析仪测得气囊蛋白Zeta电位为-7.9 mV（图1d），水合粒径为(198 ± 35) nm（图1e）。

2.2  GV@hDOX的超声成像能力

为了研究HA-DOX在GV表面接枝对其超声成像能力的影响，在34 %、46%和55%的超声功率下，对PBS、GV、HA-DOX和GV@hDOX进行超声成像（图2）。

2.3  DOX的释放曲线

利用透析法对DOX、HA-DOX和GV@hDOX药物释放能力进行测定，检测并记录了DOX、HA-DOX和GV@hDOX在pH 6.5和pH 7.4下DOX的释放量（图3）。

2.4  GV@hDOX脑胶质瘤细胞靶向能力评价

由图4a、4c荧光强度变化可知，在4.0 h内，与DOX和HA-DOX相比，Raw264.7对GV@hDOX吞噬量无明显提高；6.0 h时，由于气囊蛋白的小尺寸效应增强了巨噬细胞的非特异性吞噬，GV@hDOX处理后的细胞具有更高的荧光强度。

2.5  GV@hDOX肿瘤杀伤能力和溶血率

通过GL261细胞和巨噬细胞Raw264.7对DOX与GV@hDOX的细胞毒性进行检测，结果如图6所示。