引用本文:黄惠强，黄雨心，廖梦瑶，等.间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究[J]. 化学试剂，2024，46(8)：84-90.
DOI:10.13822/j.cnki.hxsj.2024.0151
背景介绍
杂色曲霉毒素（Sterigmatocystin，ST）是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物，其结构与黄曲霉毒素相似，具有潜在的致癌性和毒性，严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易污染ST，但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。本研究通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数，建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法（ic-ELISA），用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。该方法快速、准确、经济，可为其它中药中ST的快速检测提供参考。
文章亮点
1.建立了适用于薏苡仁中ST高通量快速筛查的ic-ELISA；
2.通过对提取和稀释过程的系统优化，克服了中药复杂基质体系的干扰，提升了方法的检测性能；
3.该研究为复杂基质中ST的检测提供了一种简便、高效的技术手段。
内容介绍
酶联免疫分析是真菌毒素快速筛查中常用的检测方法，2020年版《中国药典》[12]已收载酶联免疫分析法作为中药中黄曲霉毒素的快速筛查方法。目前，酶联免疫分析检测ST的研究相对较少，且已有研究主要针对粮食基质[13,14]，未见在中药基质检测中的应用。
本文以薏苡仁中ST为检测对象，通过系统优化样品前处理方法以最大程度降低薏苡仁基质对检测的干扰，提高检测灵敏度及准确度，建立适用于薏苡仁中ST检测的间接竞争酶联免疫分析法。
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
2 结果与讨论
2.1 抗原、抗体浓度的优化
初步研究发现当包被抗原浓度为0.031 μg/mL、抗体浓度0.063 μg/mL和包被抗原浓度为0.063 μg/mL、抗体浓度0.031 μg/mL时，其吸光度值接近于1.0（表2）。如图1所示，当抗原包被浓度0.063 μg/mL、抗体浓度为0.031 μg/mL时，检测灵敏度较高。
2.2 提取溶剂的优化
ST常用的提取溶液为甲醇-水[14,16]和乙腈-水溶液[17,18]。但相对于甲醇而言，乙腈具有较好的沉淀蛋白作用，能使提取的溶液更澄清[19]，同时根据本课题组的前期研究[15,20]， 后续实验将选用V（乙腈）：V（水）= 80 ：20作为提取溶剂。
2.3 稀释溶剂的优化
本研究首先对比了水、PBS、10 %甲醇水和10 %甲醇PBS这4种常用的稀释溶剂的效果。
后续，选取对抑制率和显色值影响相对较小的0.01 %吐温-20 PBS作为稀释溶剂，对比了溶剂标准曲线和基质匹配标准曲线的差异，结果显示两条标准曲线重合度不理想（图3），还需要进一步优化。
2.4 提取液稀释倍数的考察
2.5 料液比优化
由图5可知，当料液比为1:10时，4种不同加标水平的回收率均得到明显改善。
2.6 方法学考查
2.7 实际样品检测
3 结论
薏苡仁具有较高的营养价值和保健作用，人们喜爱以多种方式进行长期食用，而薏苡仁中污染的ST会因为蓄积而危害人体健康，因此，有必要建立简便、快速的技术手段对薏苡仁中的ST进行检测和监控。本研究基于简单的样品前处理方法，建立了一种无需任何校正，只需溶剂标准曲线即可定量的ic-ELISA，方法灵敏、准确、可靠，可用于薏苡仁中ST的大规模筛查，有助于降低食用薏苡仁产生的安全隐患，同时本研究可为其他中药中ST快速检测方法的建立提供参考。
