背景介绍
布美他尼是磺胺类袢利尿剂，广泛用于治疗各类水肿性疾病，能快速缓解液体潴留。但布美他尼原料药质量把控面临挑战，合成中因反应不完全、副反应等会引入中间体杂质；储存时受环境因素影响易产生降解产物杂质。这些杂质可能改变药物特性、引发毒副作用，威胁用药安全。现行药典标准多侧重杂质总量控制，对多种杂质同步精准检测存在局限。因此，建立高效液相色谱法同时测定多种杂质，对保障药品质量、确保患者用药安全意义重大。
文章亮点
1. 分离高效精准：研究人员精心优化流动相梯度洗脱程序，并巧妙选择色谱柱，成功实现8种杂质与主峰的完美分离，分离度均＞1.5，为每种杂质开辟专属“通道”，确保检测结果不受干扰。
2. 线性范围宽广：该方法线性范围覆盖0.02～4.12 μg/mL，无论杂质含量高低，都能准确检测。
3. 回收稳定可靠：加标回收率93.0% ～101.2%，RSD＜2%，表明方法具有良好的准确性和精密度，为药品质量控制提供了坚实可靠的数据支撑。
内容介绍
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
对照品：布美他尼（批号100173-201303，含量99.9%，中国食品药品检定研究院）；杂质A～J对照品，来源见表1，含量≥95.5%。
1.2 实验方法
1.3 杂质谱来源
杂质谱来源见表2。
2 结果与讨论
2.1 色谱柱选择
分别选择Thermo Hypersil GOLD C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm）和Phenomenex Luna C8（4.6 mm × 150 mm，3.5 μm）对布美他尼及其杂质进行测定。实验发现，采用Phenomenex Luna C8（4.6 mm × 150 mm，3.5 μm）色谱柱时，杂质C、D的分离度＜1.0，布美他尼主峰理论板数仅为2084,。而用Thermo Hypersil GOLD C18柱时，杂质C、D的分离度＞1.5，布美他尼主峰的理论板数达到407078。故采用Thermo Hypersil GOLD C18柱进行试验。
2.2 流动相考察
参考《中国药典》2020年版二部及EP11.0，分别选用V(甲醇):V(0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液) =70:30（用7 mol/L氢氧化钠溶液调节至pH 7.0）；再加入四己基溴化铵配制成2.17 g/L的浓度为流动相和V（甲醇）：V（0.1%三氟乙酸溶液）=58：42为流动相。选用V(甲醇):V(0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液) =70:30（用7mol/L氢氧化钠溶液调节至pH 7.0）；再加入四己基溴化铵配制成2.17g/L的浓度为流动相时，布美他尼主峰拖尾严重且基线漂移。而选用V（甲醇）：V（0.1%三氟乙酸溶液）=58：42为流动相时，除了杂质C未被洗脱下来，其他杂质峰均被洗脱下来，且主峰对称性良好，但杂质D峰形较宽，可能对有机相比例敏感，考虑更换梯度洗脱程序。故选用甲醇-0.1%三氟乙酸溶液为流动相。
2.3 梯度洗脱程序优化
根据《中国药典》2020年版二部中布美他尼有关物质检查以V（甲醇）：V（0.1%三氟乙酸溶液）=58：42为流动相，但该等度洗脱条件下无法将8个杂质全部分离开，故考虑用梯度洗脱程序。经反复通过动态调节有机相甲醇比例试验，各杂质峰与主峰分离度和各杂质之间的分离度均大于1.5，不干扰主成分的测定（图1）。经系统优化结果为以0.1%三氟乙酸溶液为流动相A，甲醇为流动相B，梯度洗脱程序见表3。
2.4 检测波长的选择
2.5 方法学考察
2.6 样品测定
对3批布美他尼样品，分别按照1.2.3方法制备供试品溶液并依照1.2.5色谱条件进行测定，计算各杂质的含量，结果见表10。
3 结论
通过实验对3批样品的测定得出，杂质A、J、I、C、G均未检出，杂质B的含量分别为0.011%、0.012%、0.011%，杂质E的含量分别为0.044%、0.059%、0.064%，杂质D的含量分别为0.001%、0.007%、0.001%，最大单个杂质含量均未超过0.070%，总杂质含量均未超过0.080%，与《中国药典》2020版二部中布美他尼有关物质标准规定相比，可以制定更严的限度标准。所建立的方法相比《中国药典》2020版中方法，8种杂质均能完全分离，能单独计算每种单个杂质的含量，对于布美他尼的质量控制更严格。通过研制出的8种杂质对照品，能更简便高效判断出样品中各杂质能否被检出且能直接用外标法计算出各杂质的含量，不需要使用通过计算校正因子自身对照法，该方法更简便且高效。方法学验证表明，其灵敏度、精密度与准确度均符合国际标准，样品检测结果证实工艺稳定性良好。本方法不仅为布美他尼的质量控制提供了科学工具，也为复杂原料药的杂质分析建立了可推广的思路。
