背景介绍
恶性肿瘤是全球重大健康挑战，现有疗法在疗效与毒性方面仍有局限。甾体化合物因其良好的生物相容性与多样生理活性，已成为抗肿瘤药物设计的重要骨架；而羟肟酸作为组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，在肿瘤治疗中显示出广阔前景。本研究基于“分子杂交”策略，将甾体与羟肟酸通过酯键缀合，构建了一系列结构新颖的甾体-羟肟酸缀合物，旨在开发兼具高活性与低毒性的抗肿瘤候选分子。
文章亮点
1. 结构创新与合成优化：首次通过酯键连接甾体与羟肟酸片段，设计并合成了系列新型缀合物。系统优化了合成条件，显著提高了关键中间体与目标产物的收率，为后续结构修饰与活性研究奠定了坚实基础；
2. 作用机制深入阐释：通过分子对接研究，揭示了化合物与HDAC酶的结合模式差异：部分依赖疏水相互作用增强结合亲和力，部分通过与锌离子结合发挥催化抑制潜力。首次明确了甾核结构与连接链长度对活性的协同调控关系，为理性药物设计提供了理论依据；
3. 类药性初步评估：通过计算机辅助ADMET分析，系统评估了候选化合物的吸收、分布、代谢与毒性特性。尽管存在细胞渗透性较低、蛋白结合率较高等挑战，部分化合物仍展现出中等药效开发潜力，为后续结构优化指明了方向。
内容介绍
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
2 结果与讨论
2.1 化学部分
首先构建羟肟酸片段。以己二酸单乙酯和辛二酸单甲酯为原料，通过缩合反应及碱性水解法，合成氧代三苯甲基保护的胺基己酸、胺基辛酸及4-氧-(氧代三苯甲基-胺基)-苯甲酸中间体（图6）。
2.2 生物部分
构效关系研究（表3、图8、图9）表明：1）胆甾烷结构支链的缀合物未显示肿瘤细胞抑制活性；2）对于孕烯醇酮缀合物，活性随支链碳原子数增加而减弱（化合物4a>4b）；而对于去氢表雄酮缀合物，活性则随碳链增长而增强（化合物4e<4f）；3）在相同取代基下，去氢表雄酮缀合物的细胞毒性优于孕烯醇酮缀合物；4）三苯甲基保护的酰羟胺前体无抗肿瘤活性，脱除保护基后的终产物均表现出良好活性，且部分化合物对T47D细胞的抑制活性显著优于其他测试细胞系。
2.3 分子模拟部分
2.3.1 分子对接(6V7A)
为深入探究目标化合物与SKOV-3和T47D肿瘤细胞的相互作用模式及结合亲和力，本课题组进一步针对HDAC 6(PDB ID:6V7A)进行了分子对接研究（图10）。
2.3.2 化合物4a、4b计算机辅助ADMET计算细胞毒性测试
通过计算机辅助ADMET计算，对化合物4a和4b的吸收与分布性质进行了评估（表6、表7）。
3 结论
本研究采用分子杂交与分步片段合成策略，成功构建了一系列新型甾体-羟肟酸缀合物。通过系统优化，确立了以二氯甲烷为溶剂、DCC为缩合剂、DCC/DMAP物质的量之比1:1.5、反应温度35 ℃的最佳合成条件，关键中间体与目标产物收率良好，满足活性筛选需求。
活性研究表明：羟肟酸基团是必要药效团，孕烯醇酮与去氢表雄酮衍生物活性优于胆固醇衍生物。C4链利于T47D，C7链利于HeLa或HepG2，且与甾核结构协同作用。部分化合物在特定细胞系（如T47D）中活性优于SAHA，具备选择性抗肿瘤潜力。机制研究揭示，化合物4a与4b的作用机制存在差异：化合物4a主要通过疏水相互作用展现突出的结合亲和力，而化合物4b则凭借与锌离子的结合在催化抑制方面更具潜力。ADMET预测提示两者虽存在吸收与毒性方面的挑战，但仍具中等药效潜力，后续优化应聚焦于提高选择性，平衡效价与细胞毒性，进一步结构优化与深入研究。
