杨树桑黄多糖提取工艺与测定
(1.长白山科学研究院长白山生物群落与生物多样性吉林省联合重点实验室，吉林延边朝鲜族自治州 133613；2.白城市食品药品检验所，吉林白城 137000；3.海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室热带环境与健康实验室 海南海口 571199)
摘要
引言 杨树桑黄（Sanghuangporus vaninii(Ljub.) L.W. Zhou & Y.C. Dai）因其子实体生长在杨树上而得名，是传统菌物药“桑黄””基源物种之一[1]。“桑黄”始载于秦汉时期的《神农本草经》，在历代的本草著作中被广泛记载和描述，具有活血、止血、化饮、止泻之功效[2]。东亚地区的日本和韩国也将桑黄作为一种传统草药，并将杨树桑黄作为“桑黄”来应用，市场认可度较高[3,4]。现代研究表明，桑黄多糖具有良好的抗肿瘤、抗氧化、抗炎、免疫调节等药理活性作用[5-9]。 桑黄中含有的多糖成分具有良好的抗肿瘤作用，是评价不同来源桑黄质量的重要指标[10,11]。目前，桑黄暂无国家级质控标准，在已颁布并实施的省级质量标准中，均将桑黄多糖含量列为重要质控指标。然而，不同省份桑黄标准中采用的提取工艺和测定方法却不相同[12-14]，桑黄多糖的提取方法主要有溶剂浸提法、超声提取法、微波提取法、低温低压提取法、增压提取法等[15]。其中，溶剂浸提法效率不高；低温低压提取法和增压提取法常受限于实验条件限制，多糖产量不高且在市场质量控制中并不普及；响应面法响优化桑黄规模化人工栽培条件的研究已有报道[16]，尚未有关于响应面法优化杨树桑黄提取工艺的研究。基于以上情况，选择桑黄多糖为指标，进行提取工艺及分析方法的比较，以优化出科学的桑黄多糖测定方法显得更为重要。 正文部分 1 实验部分 1.1 主要仪器与试剂 1.2 提取工艺比较 1.3 响应面法优化超声提取工艺 1.3.1 超声提取工艺的单因素试验 1.3.2 响应面法优化超声提取工艺 1.4 测定方法比较 通过蒽酮-硫酸法[12]、苯酚-硫酸法[13]对多糖进行测定，分别参考省级桑黄质量标准方法，并进行方法学考察试验。 1.5 水分测定 按照《中国药典》2015年版四部通则0832第二法，测定样品水分。 1.6 数据分析 UVProbe 2.70软件以浓度为横坐标、吸光值为纵坐标绘制对照品标准曲线，多糖含量计算水分计算参照《中国药典》方法[17]。 2 结果与讨论 2.1 提取工艺初筛 比较微波提取、超声提取、加热回流、70 ℃水浴浸提工艺对桑黄多糖含量的测定结结果，如表1所示。 2.2 响应面法优化多糖提取工艺 2.2.1 单因素试验结果 以各因素水平为横坐标、多糖含量为纵坐标，结果见图1。 2.2.2 响应面法优化超声提取工艺 表2为确定的超声工艺3个因素、3个水平值，运用Desgin-Expert软件，以桑黄多糖含量为响应值，Box-Behnken的组合设计3因素3水平共17个实验，结果见表3。 图2～4为多糖提取工艺中各因素间的等高线图与3D图谱，较好地反映了因素间的交互作用。 2.2.3 验证实验 优化后桑黄多糖超声提取工艺为：超声时间27.06 min、液料比408.46:1（mL/g）、超声频率55.08 kHz，此条件下提取桑黄多糖含量的预测值为3.04%。 2.3 两种多糖测定方法比较 2.3.1 吸收波长比较 采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法对葡萄糖对照品和桑黄多糖样品进行测定，扫描其在400～900 nm区域的最大吸收波长，吸光度变化如图4所示。 2.3.2 稳定性结果比较 分别采用苯酚-硫酸和蒽酮-硫酸法对杨树桑黄多糖溶液12 h内稳定性进行测定，其结果见图5。 2.3.3 重复性结果比较 分别采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法对6份杨树桑黄多糖样品溶液进行吸光度测定，结果见表6。 2.3.4 准确性结果比较 如表7所示，参考中国药典2015版要求，两种方法测定的回收率相对标准偏差均在1.5%之内，回收率为95%～102%。 3 结论 结论
引用本文：长城，赵俊华，于文杰，等. 杨树桑黄多糖提取工艺与测定[J].化学试剂, 2021, 43(7): 973-978.
