《化学试剂》编委李金花研究员等：胶体金免疫层析法快速检测动物源食品中的诺氟沙星
目前，国内对诺氟沙星（NOR）含量检测的标准方法为液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法，方法的灵敏度高、稳定性好，但普遍存在操作繁琐、耗时长、成本高的缺点，无法满足快速大批量检测的需求，此外标准方法测定需要有一定专业水平的人员操作，不适合现场检测。在个别动物源性食品中存在类似的干扰物易出现假阳性结果，经高分辨质谱确认后可予以排除，但在基层实验室检测时很难实现高分辨质谱确认。本研究采用胶体金免疫层析，与LC-MS原理完全不同，而且快速简单，是一种可行的选择，对假阳性结果也有排除的作用和意义。
1. 该方法简单快速、灵敏准确，应用门槛较低，对于假阳性结果也有排除作用和意义；
2.更适合基层实验室及现场检测，极大提升了检测方法的普适性，为行业同类检测需求提供了更多选择，可以满足基层监管部门和生产企业对动物源性食品中NOR的控制要求。
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
1.2.1 标准溶液的配制
1.2.2 稀释液的配制
1.2.3 试样制备
1.2.4 测定
取100 μL待测液于微孔试剂中，缓慢抽吸约5~6次，至样品与微孔试剂混匀，开始计时；室温（20~25℃）孵育2 min，吸取微孔中全部液体于加样孔中或插入试纸条，操作同时开始计时，室温反应5 min后即可判读结果。1.2.5 质控试验
质控试验包括空白试验和加标质控试验。空白试样经参比方法检测且未检出恩诺沙星（Enrofloxacin, ENR）、PEF、LOM和OFL。加标质控试验：称取空白试样3 g（精确至0.1 g）置于50 mL离心管中，加入6 μL（1 μg/ mL） NOR标准工作液，使样品中NOR浓度为2 μg/kg，按照1.2.4步骤与样品同法操作。更换快检试剂品牌、批次时，均应进行空白试验和加标质控试验。2.1 制备/合成条件优化
在规定时间内，通过比较T线与C线的颜色深浅进行结果判定。检测卡目视判定结果如图1所示，试纸条目视判定结果方法与检测卡相同。
2.2 两种方法结果比对
我国现行NOR检测标准包括GB/T20366-2006《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》[21]、农业部1077号公告-1-2008《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》[22]等。本实验选取GB/T 20366-2006标准作为参比方法，定量限为1.0 μg/kg。在市场随机抽取鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡蛋各20份，分别使用GB/T 20366-2006和NOR胶体金免疫层析法进行检测，考察不同基质样品中2种方法结果的一致性和相对准确度。2.3 方法性能评价
2.3.1 灵敏度
测定NOR不同浓度（0、0.5、1、2、4、6 μg/kg）的标准品，结果如图2所示。当浓度＜2 μg/kg时，T线产生明显色差，而C线几乎无颜色变化，此时无法通过颜色确定NOR的精准浓度。当测定2 μg/kg的NOR标准品时，T线与C线呈现明显色差，因此灵敏度确定为2 μg/kg。
2.3.2 检出限
在经验证结果为阴性的样品中，分别加入适量的NOR标准溶液，使得加标浓度分别为0、0.5、1、1.5、2 μg/kg，每个浓度水平检测10批次样品，计算其灵敏度，当灵敏度达到100%时，对应的浓度即为本方法的LOD。计算公式如下：
2.3.3 特异度、假阳性率与假阴性率
通过对本方法的特异性、假阳性率和假阴性率进行评价。灵敏度的计算公式如下：
在ENR、PEF、LOM、OFL结果均为未检出的鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡蛋样品中，添加LOD水平的NOR标准溶液进行检测，每种基质中加标样品20批、阴性样品20批，结果如表3所示。
通过胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品猪肉、鸡肉、鱼肉、虾肉、鸡蛋中NOR残留，对NOR胶体金免疫层析法进行了方法验证。因此，胶体金免疫层析法可以作为现场或者基层实验室的大采样量快速初筛方法，有效避免含有此类物质的动物源性食品的流通威胁人们的健康。同时，该研究也为快速检测复杂基质中的抗生素提供了普适性思路和产品。该研究仅利用比色法进行可视化检测，暂未利用仪器进行精准定量，后续可以对可疑样品加强仪器分析。该方法不仅可以针对食品分析，而且可以拓展到环境和生物样品等其他复杂样品的分析，前景广阔。
