氨基糖苷类抗生素（Aminoglycosides，AGs）是一类高效广谱的抗菌药物。因人类的不合理使用，导致其在食物中广泛残留。为保障食品安全和人体健康，我国对食品中AGs残留的监管力度在不断加强。然而，AGs的强极性、无紫外吸收等特点使其在动物源食品中的残留检测成为挑战。因此，开发快速准确测定动物源食品中AGs残留的方法具有重要意义。本研究以9种常用的AGs为研究对象，通过优化色谱与前处理条件，建立了高效灵敏的同时测定猪肉中9种AGs残留的方法，为动物源食品中AGs的残留监督提供了方法支持。1.建立了SPE-UPLC-MS/MS同时测定猪肉中9种氨基糖苷类抗生素残留的方法；
2.采用BEH Z-HILIC色谱柱和低浓度缓冲盐流动相，实现9种AGs的有效分离；
3.采用固相萃取方法进行前处理，操作简单、净化效果好；灵敏度高，适用于准确测定猪肉中AGs残留。
1.2 标准溶液的配制
1.3 样品处理
1.3.1 样品制备
从福建省福州市各超市及农贸市场上采集猪肉样品，使用绞肉机处理为均匀肉泥后冷冻干燥72 h，研磨成粉末后独立封装于铝箔袋中，于-80℃下贮藏，待测时提前取出。1.3.2 样品前处理
称取0.5 g预处理后的猪肉样品于50 mL聚丙烯离心管中，加入200 μL（150 mmol/L）EDTA溶液，静置10 min后，加入5 mL 5% TCA溶液，涡旋2 min，超声5 min，静置于-20 ℃冰箱30 min。1.4 仪器条件
2.1 色谱条件优化
本研究选用的BEH Z-HILIC色谱柱（2.1 mm×100 mm, 1.7 μm）色谱柱，依据文献[26]报道，该色谱柱可以使用低浓度缓冲盐的流动相实现AGs的有效分离，选择20 mmol/L甲酸铵溶液（pH 3）和含0.1%甲酸的乙腈分别作为流动相A和B，用1 μg/mL标液进样，通过调整进样量、梯度洗脱及流速，最终得到的各物质提取离子流图（图1）。
2.1.1 流动相的优化
本实验采用9种AGs的混合标准溶液进行液相条件的优化，依据相关文献[4,25,27]初步采用含0.1%甲酸的乙腈和20 mmol/L甲酸铵溶液为流动相进行优化。2.1.2 流动相流速的优化
流动相的流速是色谱分离中的一个重要参数。对比了0.4、0.5、0.6 mL/min流速对9种AGs分离效果的影响。实验显示，当流速增加时，9种AGs的出峰时间均提前，目标物质的总分析时间缩短。同时，从图2可以看出，当流动相流速为0.5 mL/min时，TOB、KAN、AMI、HYG、STP和RIB的响应强度均高于另外两个流速的响应强度，故综合出峰时间和响应强度，本研究选择流速0.5 mL/min。
2.2 提取条件的优化
根据相关参考文献[28,29]，本研究对两种提取溶液进行了试验：提取液A（10 mmol/L乙酸铵缓冲溶液（含2% TCA、0.4 mmol/L EDTA、0.5% 氯化钠））和提取液B（150 mmol/L EDTA溶液、5% TCA溶液）。如图4所示。
2.3 固相萃取条件的优化
本实验比较了Oasis HLB固相萃取柱（6 mL，500 mg）和Oasis WCX固相萃取小柱（6 mL，500 mg）的净化效果。如图5所示
2.4 洗脱条件的优化
本实验比较了2种洗脱液（洗脱液A：V（甲酸）:V（甲醇）=1:10；洗脱液B：V（甲酸）:V（水）=1:10和V（异丙醇）:V（水）=1:20）对9种AGs回收率的影响。
本研究建立了固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱测定猪肉中阿米卡星、安普霉素、潮霉素B、卡那霉素、巴龙霉素、核糖霉素、大观霉素、链霉素、妥布霉素的分析方法。通过优化液相条件和前处理过程（提取和净化条件），利用BEH Z-HILIC色谱柱实现了猪肉样品中9种AGs的有效分析。该方法避免了液相中离子对试剂和高浓度缓冲盐的使用，前处理操作简单、净化效果好，可完成多种AGs的同时检测，为猪肉中AGs残留监测提供了技术参考。2024.0456固相萃取￣超高效液相色谱￣串联质谱法测定猪肉中.pdf
