2.2  纳米金的表征及DAPI介导纳米金聚集分析

实验对反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。如图4所示，泳道1、2为RSV序列条带和HP条带，作为实验对照条带。泳道3仅出现了RSV条带，Primer因只含8个碱基在电泳图上未显示，说明RSV与Primer不发生反应。

将不含RSV的阴性组和含RSV的阳性组进行信号对比。如图5a、5b所示，阴性组中无RSV序列，发夹探针和引物未发生聚合反应，溶液中核酸链与DAPI结合少，过量的DAPI介导纳米金聚集，使溶液变成蓝色，吸收峰在610 nm。阳性组中加入终浓度100 pmol/L的RSV序列，发生ICSDPR扩增反应，将发夹探针和引物聚合形成富含AT碱基对的dsDNA。

为达到最佳的实验条件，研究对关键参数进行了优化。DAPI浓度是影响纳米金聚集的重要因素，实验设置不同DAPI浓度（5、12.5 、20 、30 μmol/L），并对比含不同浓度DAPI的背景组和信号组的颜色变化。

综上，可以发现DAPI可作为一种新型纳米金聚集诱导剂，其通过电荷吸引作用介导AuNPs聚集。与常规的盐诱导聚集相比，DAPI诱导的聚集能产生更明显的颜色变化以及更高的灵敏度。基于DAPI介导纳米金聚集的新传感模式，联合循环链置换聚合反应进行信号放大，成功建立了一种检测呼吸道合胞病毒核酸的比色传感新方法，检测限达3.8 fmol/L。该方法无需进行RNA逆转录，能够在37 ℃恒温反应1 h完成检测，以颜色及吸光度作为输出信号，所需设备试剂简单，便于即时诊断测试。然而，本方法无逆转录工作流程，使得对病毒RNA的保存条件要求较高，有望通过进一步优化以应用于实际临床样本检测。DAPI诱导纳米金聚集是基于正负电荷吸引作用，适用于其他带负电荷的等离子体纳米颗粒，有望为比色传感开发提供新途径。另外，通过对HP靶标识别区针对性的设计，可拓展应用于对其它病毒的检测。